多肽荧光标记由于没有放射性，实验操作简单。因此，目前在生物学研究中多肽荧光标记应用非常广泛，多肽荧光标记方法与荧光试剂的结构有关系，对于有游离羧基的采用的方法与接多肽反应相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接。 在N端标记FITC的多肽需经历环化作用来形成荧光素，通常会伴有最后一个氨基酸的去除，但当有一个间隔器如氨基己酸，或者是通过非酸性环境将目的多肽从树脂上切下来时，这种情况可避免在切割的过程中被TFA切割掉。
        人们利用利用荧光标记的多肽来检测目标蛋白的活性，并将 其发展的高通量活性筛选方法应用于疾病治疗靶点蛋白的药物筛选和药物开发（例如，各种激 酶、磷酸酶、肽酶等）。
        正肽生化能够提供技术成熟的各种荧光标记多肽。

下面是一些常见的多肽修饰荧光物质结构：




FITC标记

      FITC(异硫氰酸荧光素)具有比较高的活性，我们公司可以通过两种方式将FITC标记于多肽 上：(1) 将FITC标记于赖氨酸（Lys）或被选择性地脱保护的鸟氨酸（ornithine）侧链氨基 上；(2) 将FITC标记于多肽N端氨基。

      当在N端标记时，建议在最后一个氨基和由异硫氰酸酯与氨基反应产生的硫脲键之间引入 烷基间隔器（alkyl spacer），如氨基己酸（Ahx）。链接切割需要酸性环境，在N端标记FITC 的多肽需经历环化作用来形成荧光素，通常会伴有最后一个氨基酸的去除，但当有一个间隔器 如氨基己酸，或者是通过非酸性环境将目的肽从树脂上切下来时，这种情况可避免。空间位阻 被认为是在荧光染料前使用Ahx的主要原因，而不是为什么FITC不能直接偶联在多肽上的原因。

      Ahx或b-Ala均可作为间隔器用于FITC标记的多肽上。

 

普通荧光修饰

荧光修饰中文名称	N端	N端带有linker
生物素标记多肽	Biotin-	Biotin-Ahx-
异硫氰酸荧光素	FITC-	FITC-Ahx-
5-羧基荧光素	5-FAM-	5-FAM-Ahx-
丹磺酰荧光素	Dansyl-	Dansyl-Ahx-
5-羧基四甲基罗丹明	TMR-  （TAMRA-）	TMR-Ahx-  （TAMRA-Ahx-）

通过Lys侧链氨基连接的荧光修饰

多肽N端	多肽序列中间	N端带有linker
生物素标记多肽	Biotin-	多肽C端
Lys(Biotin)-	-Lys(Biotin)--	-Lys(Biotin)
Lys(FITC)-	-Lys(FITC)-	-Lys(FITC)
Lys(5-FAM)-	-Lys(5-FAM)-	-Lys(5-FAM)
Lys(Dansyl)-	-Lys(Dansyl)-	-Lys(Dansyl)
Lys(TMR)-	-Lys(TMR)-	-Lys(TMR)
Lys(Dnp)-	-Lys(Dnp)-	-Lys(Dnp)

我司常做的荧光物质的激发光波长和发射光波长。可供参考选择：

荧光基团	Ex（nm）	Em（nm）	荧光基团	Ex（nm）	Em（nm）
羟基香豆素	325	386	R-phycoerythrin (PE) (489)	565	578
丹磺酰氯	340	578	Rhodamine Red-X	560	580
AMC	345	445	Tamara	565	580
甲氧基香豆素	360	410	Alexa fluor 555	556	573
Alexa fluor 系列	345	442	Alexa fluor 546	556	573
氨基香豆素	350	445	Rox	575	602
Dabcyl	453	-	Alexa fluor 568	578	603
Cy2	490	510	Texas Red	589	615
FAM	495	517	Alexa fluor 594	590	617
Alexa fluor 488	494	517	Alexa fluor	621	639
FITC	495	519	Alexa fluor 633	650	668
Alexa fluor 430	430	545	Cy5 (625)	650	670
5-FAM	492	518	Alexa fluor 660	663	690
Alexa fluor 532	530	530	Cy5.5	675	694
HEX	535	556	TruRed	490; 675	695
5-TAMRA	542	568	Alexa fluor 680	679	702
Cy3	550	570	Cy7	743	767
TRITC	547	572	Cy3.5	581	596